從細胞、組織或酵母中純化至多100μg的總RNA
數分鐘內快速純化得到高品質總RNA
即用型RNA在各種下游應用中表現良好
少量起始樣本,RNA產量穩定
無需酚/ 氯仿抽提,無需氯化銫梯度離心,無氯化鋰或者乙醇沉淀步驟
RNeasy Mini Kit可從細胞、組織或酵母中快速純化高品質RNA,硅膠膜RNeasy離心柱的結合能力達100 μg RNA。使用RNAlater RNA Stabilization Reagent或Allprotect Tissue Reagent可方便的穩定組織樣本,使用TissueRuptor或TissueLyser體系可有效的破碎組織??稍赒IAcube全自動核酸純化儀上應用RNeasy Mini Kit實現RNA純化自動化。處理更小或更大的樣本,可使用RNeasy Micro Kit(離心柱結合能力為45 μg RNA)、RNeasy Midi Kit(離心柱結合能力為1 mg RNA)和RNeasy Maxi Kit(離心柱結合能力為6 mg RNA)。
Performance
RNeasy Mini Kit可從至多30 mg動物或人類組織樣本,或從100–1 x 107個動物或人類細胞樣本或酵母中純化總RNA(參見”RT-PCR of RNA from as few as 100 cells”和”High-quality RNA from a variety of samples”)。
RNeasy Mini Kit純化得到的總RNA產量
樣本來源 | 起始材料 | 平均產量(μg) |
動物細胞 | ||
LMH | 1?x 106 | 12 |
HeLa | 1?x 106 | 15 |
COS-7 | 1?x 106 | 35 |
淋巴細胞(未受激) | 1?x 106 | 0.5 |
小鼠組織 | ||
肝 | 10 mg | 40 |
肺 | 10 mg | 10 |
脾 | 10 mg | 35 |
真菌細胞 | ||
S. cerevisiae | 1?x 107 | 25 |
Principle
RNeasy Mini Kit可從少量的樣本中高效純化總RNA。RNeasy純化技術整合了苯酚/異硫氰酸胍裂解的嚴謹性和硅膠膜純化的速度和純度,簡化了總RNA純化技術。純化得到高品質的RNA,并且DNA殘留水平達到最低。
Procedure
RNeasy Mini Kit可從10–1 x 107個動物或人類細胞中、0.5–30 mg動物或人類組織中或小于5 x 107個酵母細胞中方便的純化總RNA。先對樣本進行破碎和勻漿。在裂解物中加入乙醇以提供合適的結合條件。然后將裂解物上樣至RNeasy硅膠膜(參見”RNeasy Mini spin column”)。RNA結合到膜上(最多可結合100 μg),污染物被高效洗去。對于某些對少量DNA十分敏感的RNA應用,可在RNeasy操作過程中進行柱上DNA酶處理,去除DNA殘留。之后可在30–100 μl的純水洗脫液中得到高濃度的純化RNA(參見”RNeasy Mini procedure”)。還有各種特殊應用的實驗方案可供選擇。
Applications
使用RNeasy技術純化得到的RNA的A260/280比為1.9–2.1(10 mM Tris-·Cl、pH 7.5的溶液中),適用于多種下游應用,包括:
Northern印跡、點印跡和狹縫印跡
終點式RT-PCR
定量real-time RT-PCR
芯片分析
Poly A+ RNA篩選
Features | Specifications |
應用 | PCR, qPCR, real-time RT-PCR, microarray |
洗脫體積 | 30–100 μl |
規格 | Spin column |
主要樣本類型 | Tissue, cells |
處理 | Manual (centrifugation) |
純化總RNA、miRNA、poly A+ mRNA、DNA或蛋白 | Total RNA |
樣本量 | 0.5–30 mg |
技術 | Silica technology |
每次運行或制備時間 | 20 minutes |
產量 | Varies |