Wako熱啟動 PCR用DNA聚合酶——Hot-Start Gene Taq

Wako熱啟動 PCR用DNA聚合酶——Hot-Start Gene Taq

2514694138412242.jpg

本產品是Hot Star PCR用的耐熱型DNA聚合酶。進入PCR循環前先經過95℃,5分鐘的熱處理,對本產品進行酶活性化處理。

在PCR初期需要進行過量酶活抑制的熱啟動PCR,以抑制引導錯誤、無效酶失活。根據用途的不同,附有可分開使用的2種10倍濃度的反應緩沖液。

◆特點

● 高特異性和DNA高回收率
● 具有熱啟動功能,可在室溫條件下配制反應液
● 最適用于多路傳輸PCR
● 極少有宿主源DNA混入,純度高

◆產品組成

Hot Start Gene Taq 250 units 50 units
dNTP 混合物
(2.5 mmol/L each)
800 μL×1瓶 160 μL×1瓶
10×Gene Taq通用緩沖液
(15 mmol/Ll Mg2+)
1 mL×1瓶 1 mL×1瓶
10×Brilliant Buffer
(20 mmol/L Mg2+)
1 mL×1瓶 200 μL×1瓶

◆產品信息

M.W. 68 kDa
活性 2.5 units/μL
單位的定義 1 unit是指以活化小牛胸腺DNA為引物/模板,在74℃下,30分鐘內,將10nmol的脫氧核苷酸滲入不溶酸沉淀物,使其酶活化。
形狀 20 mmol/l Tris-HCl (pH8.0)、100 mmol/l KCl、0.1 mmol/l EDTA、0.5 % Tween 20、1 mmol/l DTT、50%甘油
純度 將10 units本酶和1μgλ/HindⅢ digest,在74℃下反應1小時,無法辨別對瓊脂糖凝膠電泳樣品的影響。

 

◆實驗案例

以HeLa DNA(50ng)為模板,對下列三種擴增困難的引物進行Shuttle PCR。

【引物】

?A-1
F:5′-AGTGGGCAGAGCCAGTCACT-3′
R:5′-AGACTGGATGCCCAGCCTAA-3′
?A-2
F:5′-CAGACTCTGGGGCTGCCCAT-3′
R:5′-TCAAACACTGGCTTGGGGTA-3′
?A-3
F:5′-CCTTGGAGCAATGAGCAATG-3′
R:5′-CATCTTTCCAGGCTCCTTCC-3′

【實驗方法】

模板DNA 50 ng
引物 (10 μM each) 1 μL
10×反應緩沖液 5 μL
聚合酶 5 μL
dNTP 混合物 0.2 mM
聚合酶 0.25 U
總量 50 μL
PCR條件 95℃, 5 分鐘

(95℃, 30 sce→68℃, 1.5 min)×30 周期

68℃, 3 分鐘

4℃

 

【結果】

在熱啟動Gene Taq使用Brilliant Buffer,即使低特異性的引物,也可實現高特異性擴增,使目的擴增產物取得高回收量。

1.jpg

◆產品信息

產品編號 產品名稱 包裝
313-07044 熱啟動基因Taq酶

Hot-Start Gene Taq

50 units
319-07041 250 units
315-07043 250 units×4