Wako和光純藥297-51501 SLP Reagent Set 3mL

Wako和光純藥297-51501 SLP Reagent Set 3mL

SLP Reagent Set (真菌和細菌感染快速檢測)
——肽聚糖和(1→3)-β-D-葡聚糖定量檢測
家蠶的淋巴有一種自我保護機制,被稱為“酚氧化酶原串聯反應”。當受外界入侵(如細菌和真菌)時,
這個串聯反應參與黑色素的形成并使機體免受攻擊。這個反應由細菌中的肽聚糖或是真菌、酵母中的(1→
3)-β-D-葡聚糖引發,該反應中的酚氧化酶原被激活。也有人認為絲氨酸蛋白酶也參與了該反應,但是沒
有從這方面闡述的資料。
已消毒的SLP包括了所有參與該反應的因子,再生后的溶液中含有L-3,4-苯丙氨酸(L-3,4-
dihydroxyphenylalanine, DOPA),該物質可以作為肽聚糖或β-葡聚糖所激發的酚氧化酶的底物,DOPA被
酚氧化酶氧化,形成黑色素。肽聚糖是絕大多數細菌細胞壁的組成成分,而β-葡聚糖廣泛的分布于真菌
的細胞壁中。因此,SLP通過測定黑色素的形成情況,進而定性或定量檢測細菌和真菌的污染。
特點
1. 用于肽聚糖和(1→3)-β-D-葡聚糖的定量檢測,檢測敏感。
2. 使用酶標儀或內毒素檢測儀,能對肽葡聚糖和β-葡聚糖精確定量。
3. 不需任何特殊器械即可通過肉眼檢測出細菌和真菌的污染。
4. 凍干SLP的在2-10℃至少可保存18個月。
原理見:http://www.cxbio.com/news/news_details.asp?id=9588
當使用酶標儀或內毒素檢測儀時,通過測定反應的始動時間和由顏色變化而導致的吸光度的變化,即可對
肽聚糖或β-葡聚糖進行定量。
所含試劑(所有試劑均存放于2-10℃):
1. 凍干SLP???????????? for 3ml
使用酶標儀或者目測約50Test,使用內毒素檢測儀約30Test
2. 凍干底物???????????? for 3ml
含有作為酚氧化酶底物的DOPA
3. 稀釋液?????????? 4ml
含有good’s buffer
試劑準備:
(A) 底物中加入3ml稀釋液,輕輕搖晃至底物完全溶解,注意避免碰到橡膠帽。
(B) 所有底物溶液加入凍干的SLP中,輕輕搖晃至SLP完全溶解,同樣,注意避免碰到橡膠帽。此溶液即為
SLP檢測液。
操作步驟
1.? 使用酶標板(微孔板)目測
(A) 分別稀釋肽聚糖和β-葡聚糖參照物,做兩個不同濃度的參照系列,每孔加入0.05ml的參照物稀釋液
或者待測樣品
(B) 每孔加入0.05mlSLP檢測液
(C) 溫和搖晃后,酶標板于30℃孵育一小時
(D) 肉眼判斷:反應液中有黑色素生成的為陽性,其它的為陰性。
(E) 參考物的最低濃度(即能生成黑色素的最小濃度)不應在SLP檢測液的最低檢測濃度以下。
(F) 樣品中SLP反應物濃度是否在SLP檢測液濃度的最低檢測范圍內,決定了樣品是陽性或陰性。
2. 使用酶標儀檢測
(A) 樣品和參考物的稀釋系列各0.05ml分別加入酶標板孔中
(B) 迅速在每孔中加入0.05mL SLP檢測液。好用消毒過的加液器。
(C) 在以下條件下使用酶標儀上測定光吸收值:
檢測波長:? 650nm
檢測模式:? 動態檢測
反應時間:? 90分鐘
檢測溫度:? 30℃
自動混勻:? 一次
(D) 繪制雙對數回歸(regression of Log-Log)標準曲線,橫軸為SLP參考物的濃度,堅軸為反應時間
(E) 通過標準曲線上的反應始動時間,計算SLP反應物質的濃度。
3. 使用內毒素檢測儀做SLP檢測,其操作步驟可以按照儀器生產商提供的操作手冊中所述的細菌內毒素檢
測方法操作。內毒素檢測儀可能會發出反應混合液缺乏透射光的信號。忽視這個的警告,測定結果不會受
此影響。
關聯試劑:
297-51501?? SLP Reagent Set??? (定量的需要另配以下標準品使用)
162-18101?? Peptidoglycan, from Micrococcus luteus肽聚糖??? 2ml
030-09903?? Curdlan? (1→3)-β-D-葡聚糖??? 1g
注意事項
1. 器械應250℃干熱滅菌至少2小時,并避免被SLP反應物污染
2. SLP凍干粉溶解后,其溶液應存于0-4℃,并盡早使用
3. 注意在器械儲存期間避免其被SLP反應物質污染
4. SLP檢測液的敏感性很大程度上受離子強度的影響
5. 該試劑盒僅用于研究,不可用于診斷;僅用于體外,不可用于人或動物體內。
(本資料只供參考,以原包裝說明書為準)
常見使用說明:
1.????? 因為SLP是被PG(肽聚糖)或BG[(1→3)-β-D-葡聚糖]所引發,在操作和使用本試劑時,單一滅
菌器皿或者使用無熱源器皿都不夠的,必須還要同時無PG和BG;
2.????? 如果是用玻璃器皿,清洗干凈后,需要在250度下干熱滅菌2小時;
3.????? 如果是一次性無菌器皿,在使用之前必須進行測試能否適用于此項檢測(即注1);
4.????? 如果使用過后還有剩余,我們認為其很可能被樣品污染,不建議繼續使用。以前我們也遇到類似
的問題,但所有的都是因為污染造成。如果用戶一定要保留一些SLP溶液,建議在未使用前進行無菌分裝
并0-4℃保存;好是將SLP凍干粉在無菌無污染條件下,按照使用計劃量預先分裝后0-4℃保存。
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